윤두서는 자연과 현실에 대한 관찰을 중시했으며, 이것은 후대에 영향을 미쳐 조선 후기 회화가 보다 사실주의적으로 전개되는 데 도움을 줬어요. 윤두서는 회화뿐 아니라 글씨와 학문에서도 뛰어 났어요. 문장에도 능해 수많은 시문을 남겼으며, 경전과 역사에 밝아 사대부로서의 품격을 갖춘 인물로 평가 되었어요. 그는 예술 활동을 통해 당대의 인간상과 사회상을 진솔하게 담아내려 했으며, 이는 후손들에게 귀중한 자료로 남아있어요. 그의 작품들은 해남 윤씨 종가에 전해 내려오며 자화상 은 국보로 지정되어 현재는 국립중앙박물관에 소장되어 있어요. 또한 공재화첩 으로 불리는 그의 그림 모음집에는 말, 인물, 산수, 동물 등이 다양하게 그려져 있는데 그의 회화 세계와 미학적 특징을 이해 하는데 중요한 자료가 돼요. 윤두서의 예술 세계는 단순한 형상의 재현을 넘어 삶의 진실을 기록하고자 한 의도가 뚜렷하며, 이는 실학적 사유와도 맞닿아 있어요. 그는 그림을 단지 미적 대상이 아닌, 인간과 자연에 대한 통찰의 수단으로 삼았고, 그러한 정신은 후손 윤용구, 윤용선, 윤영기 같은 후대 화가들에게도 이어졌어요. 특히 그의 후손 중 윤용구는 고종 시대의 유명한 서화가로 윤두서의 예술 세계를 계승하며 한국 미술사에 또 다른 발자취를 남겼어요.
